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單抗製備-細胞融合篩選過程中遇到的問題及對策

 釋出時間↟▩▩·☁:2013-12-31    點選量↟▩▩·☁:648

1↟·☁,融合率低↟·☁,陽性孔少
①免疫的問題↟↟✘。由於免疫原性不強或者免疫途徑不當造成免疫弱↟·☁,效價低↟↟✘。
②融合過程中溫度▩╃↟₪₪、時間▩╃↟₪₪、PEG分子量↟·☁,作用時間等↟↟✘。
③脾細胞是否取出了足夠多的細胞↟·☁,有無組織碎片干擾↟↟✘。
④融合前骨髓瘤細胞生長狀態是否完好↟·☁,細胞是否渾圓↟·☁,透亮↟·☁,成對數生長↟↟✘。


2↟·☁,單抗親和力整體低
①免疫的問題↟↟✘。免疫途徑不當或者免疫原問題↟↟✘。
②融合細胞篩選過程出現遺漏↟·☁,篩選方法不當或檢測方法不當↟·☁,造成沒有篩到高親和力的融合細胞↟↟✘。
③由於亞克隆細胞生長環境不合適↟·☁,導致融合細胞染色體丟失↟·☁,分泌特性改變↟·☁,親和力從高變低↟·☁,這時就需要及時更換培養液↟·☁,當細胞增長到一定密度的時候↟·☁,培養基就開始變顏色↟·☁,影響融合細胞的生長↟·☁,造成染色體丟失;控制好細胞的密度↟·☁,密度過大使新加入的培養基不至於很快被消耗↟·☁,影響融合細胞的生長↟·☁,造成染色體丟失;不要過於頻繁操作細胞↟·☁,當細胞生長密度不是很大的時候↟·☁,不要頻繁操作↟·☁,否則細胞容易出現死亡或者生長形態發生明顯變化↟↟✘。
操作細緻↟·☁,防止細胞被支原體等微生物汙染↟↟✘。

3↟·☁,抗體親和力從高變低
①沒有及時更換培養液↟·☁,當細胞增長到一定密度的時候↟·☁,培養基就開始變顏色↟·☁,影響融合細胞的生長↟·☁,造成染色體丟失或者性狀改變↟↟✘。
②控制好細胞的密度↟·☁,密度過大使新加入的培養基不至於很快被消耗↟·☁,影響融合細胞的生長↟·☁,造成染色體丟失或者性狀改變↟↟✘。
③過於頻繁操作細胞↟·☁,當細胞生長密度不是很大的時候↟·☁,不要頻繁操作↟·☁,否則細胞容易出現死亡或者生長形態發生明顯變化↟↟✘。
④細胞被支原體等微生物汙染↟↟✘。
⑤亞克隆次數超過5次↟·☁,導致細胞生長環境經常被改變↟·☁,弱的陽性雜交瘤細胞染色體丟失或者性狀改變↟↟✘。

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