單抗製備-細胞融合篩選過程中遇到的問題及對策

1↟·☁，融合率低↟·☁，陽性孔少
①免疫的問題↟↟✘。由於免疫原性不強或者免疫途徑不當造成免疫弱↟·☁，效價低↟↟✘。
②融合過程中溫度▩╃↟₪₪、時間▩╃↟₪₪、PEG分子量↟·☁，作用時間等↟↟✘。
③脾細胞是否取出了足夠多的細胞↟·☁，有無組織碎片干擾↟↟✘。
④融合前骨髓瘤細胞生長狀態是否完好↟·☁，細胞是否渾圓↟·☁，透亮↟·☁，成對數生長↟↟✘。

2↟·☁，單抗親和力整體低
①免疫的問題↟↟✘。免疫途徑不當或者免疫原問題↟↟✘。
②融合細胞篩選過程出現遺漏↟·☁，篩選方法不當或檢測方法不當↟·☁，造成沒有篩到高親和力的融合細胞↟↟✘。
③由於亞克隆細胞生長環境不合適↟·☁，導致融合細胞染色體丟失↟·☁，分泌特性改變↟·☁，親和力從高變低↟·☁，這時就需要及時更換培養液↟·☁，當細胞增長到一定密度的時候↟·☁，培養基就開始變顏色↟·☁，影響融合細胞的生長↟·☁，造成染色體丟失；控制好細胞的密度↟·☁，密度過大使新加入的培養基不至於很快被消耗↟·☁，影響融合細胞的生長↟·☁，造成染色體丟失；不要過於頻繁操作細胞↟·☁，當細胞生長密度不是很大的時候↟·☁，不要頻繁操作↟·☁，否則細胞容易出現死亡或者生長形態發生明顯變化↟↟✘。
操作細緻↟·☁，防止細胞被支原體等微生物汙染↟↟✘。

3↟·☁，抗體親和力從高變低
①沒有及時更換培養液↟·☁，當細胞增長到一定密度的時候↟·☁，培養基就開始變顏色↟·☁，影響融合細胞的生長↟·☁，造成染色體丟失或者性狀改變↟↟✘。
②控制好細胞的密度↟·☁，密度過大使新加入的培養基不至於很快被消耗↟·☁，影響融合細胞的生長↟·☁，造成染色體丟失或者性狀改變↟↟✘。
③過於頻繁操作細胞↟·☁，當細胞生長密度不是很大的時候↟·☁，不要頻繁操作↟·☁，否則細胞容易出現死亡或者生長形態發生明顯變化↟↟✘。
④細胞被支原體等微生物汙染↟↟✘。
⑤亞克隆次數超過5次↟·☁，導致細胞生長環境經常被改變↟·☁，弱的陽性雜交瘤細胞染色體丟失或者性狀改變↟↟✘。